a. Nuôi cấy đỉnh sinh trưởng
- Đỉnh sinh trưởng (ĐST) là phần chóp đỉnh của chồi ngọn và chồi bên. Tách bằng kính lúp sau khi đã khử trùng mẫu
- Mẫu được nuôi cấy trong môi trường bổ sung đủ dinh dưỡng khoáng và có chất điều hòa thích hợp: từ 1 ĐST -> 1 hay nhiều chồi -> phát triển thành thân, ra lá, rễ -> chuyển cây con ra vườn cho thích nghi điều kiện ex-vitro
Nói chung theo kinh nghiệm cá nhân thì mình ko làm cầu kì đến vậy. Nuôi cấy đỉnh sinh trưởng thường là để tạo cây sạch bệnh, kĩ thuật này rất khó thực hiện (hì hì, mình cũng chưa làm được bao giờ). Thông thường, mẫu cấy ban đầu lấy từ vườn, chọn đoạn thân gần ngọn sao cho nhìn thấy ở nách lá mấy chồi bên chưa nảy. Nếu mà chồi bên đã nhú dù nhỏ xíu thôi thì khi khử trùng cũng teo hết. Chọn mẫu vừa ý, đem về lặt bớt lá, nên dùng vật bén như dao để cắt, tránh làm dập thân thì khi khử trùng hóa chất sẽ không ăn sâu lắm. Lưu ý là lúc ngắt đoạn thân hay ngắt bớt lá thì phải chừa phần cuống dài 1 chút để sau này khử trùng bị ăn vào thì mình còn có chỗ mà gọt bớt đi, không thì cắt cụt ngủn ko cắm vào môi trường được =) . Mẹo: thường mình cắt đoạn thân sao cho có hình cái ná (chữ Y), phần chữ V ở trên là 2 đoạn cuống lá dư ra, phần I ở dưới là đoạn thân mà sau khi dc cắt ngắn bớt sẽ cắm vào môi trường. với mỗi đoạn thế này, cái chúng ta cần là đảm bảo an toàn cho 2 cái chồi nách. cắt như vầy cũng giúp bạn ko cắm ngược đoạn thân, 1 vấn đề nhỏ nhưng cũng làm đau đầu khi phải cấy số lượng lớn.
Em không đồng ý lắm với bác về mục này. Nuôi cấy đỉnh sinh trưởng (meristem) là kỹ thuật đòi hỏi phải rất tỉ mỉ. Đầu tiên chọn cây mẹ, sau đó khử trùng và tách đỉnh sinh trưởng (kích thước rất bé, thường nhỏ hơn vài mm nên rất khó). Sau đó chuyển vào nuôi cấy ở môi trường đặc biệt để tạo Calus (mô sẹo). Cuối cùng là chuyển ra để nhân nhanh. Nói chung khó nhất của kỹ thuật này là chọn môi trường thích hợp và tách được đỉnh sinh trưởng ra, là phần mà chưa phân hóa ra Phloem hay Xilem (kiểu như là tế bào gốc ở động vật), như vậy mới tạo ra cây sạch bệnh được (vì quan niệm là Virus di chuyển theo mạch, nếu chỗ chưa phân hóa chức năng hay chưa có mạch thì virus không xâm nhập được). Còn như bác nói thì em thấy giống như là giâm cành trong phòng thí nghiệm trong môi trường nuôi cấy quá.
----------------------------- Tự động gộp bài viết ---------------------------
em đang làm đề tài về phôi soma ở cây húng chanh. bước đầu tạo phôi, sau đó đưa sang điều kiện quang tự dưỡng cho phôi nảy mầm để đạt hiệu quả ex vitro cao hơn phương pháp truyền thống. hix, đi cả ngày dìa đúi như trái chúi. chỉ lăn đùng ra ngủ thoi =P
Em thấy bác làm cái này hay đấy. Đây là bước đầu của việc tạo hạt nhân tạo. Nhưng hạt nhân tạo thì người ta đặt phôi vào trong môi trường dinh dưỡng cô đặc, sau đó magn ra gieo. Còn của bác thì tạo phôi sau đó chuyển sang môi trường nuôi cấy thích hợp và cho phát triển thành cây luôn, bác nhỉ?
To Live To Fight,To Fight To Win.
|