hỏi về extract DNA

hỏi về extract DNA

mấy anh chị chú bác cho em hỏi cái này xíu.
chẳng là hôm trứơc em đi thực hành lab extract DNA từ tế bào má người và tế bào lá cây ấy mà.

đầu tiên em bỏ nước muối (0.9%) có trộn tb má vô dung dịch nứơc xà bông (25%), rồi đảo cái ống nghiệm đó một lúc. sau đó cho etanol lạnh (95%) vào đó. khoảng 5 phút sau thì có 1 lớp kết tủa màu trắng nổi lên trên mặt dung dịch.

theo em tìm ra thì nước xà bông có tác dụng làm tan cái màng tb ra, vì các phân tử xà bông có cấu trúc tương đối giống các phân tử phospholipit cấu tạo nên màng tb nên dễ dàng chen vô giữa lớp màng làm màng tan ra.

em cũng biết là DNA có điện tích âm do gốc (PO4-) gây ra, nên khi bỏ vào nước muối thì nó sẽ tác dụng với ion Na+ tạo nên kết tủa NaPO4.

nhưng mà em không hiểu là tại sao lúc chưa trộn etanol vào trong dd có tb (gồm có nước xà bông, nước muối, và tb) thì mình không thấy kết tủa, trộn vào rồi để 1 lúc mới thấy? và tại sao phải là etanol để lạnh thì mới được?

có phải tại muối NaPO4 tan trong môi trường nứơc va chỉ kết tủa trong môi trường rượu không ạ?

và các bác cho em hỏi thêm là trước khi mình thu được kết tủa có DNA đó, thì mình còn phải tách các phân tử Histon ra nữa chứ, đúng kg ạ? mà trong các bước thí nghiệm như tren thì em đâu thấy bước nào có vẻ như là để tách Histon ra đâu ạ?

các bác khai sáng hộ em với. cảm ơn các bác ạ

chào bạn,
làm gì có muối NaPO4 của bạn. Cái gốc PO4 vẫn nằm trên khung xương cácbon của cấu trúc DNA mà.
DNA kết tủa trong môi trường EtOH, Isopropanol bạn àh. EtOH lạnh thì tủa tốt hơn. Thông thường phải ném vào -20oC 1 lúc mới tủa tốt.
Vì cái quy trình mà bạn thực tập chỉ là quy trình demo thôi. Thực tế nếu muốn tách DNA hiệu suất và có độ tinh sạch cao thì ng ta phải lắc phenol - chlorôform để loại protein trong tế bào đi. Trong tế bào có rất nhiều protein, cái loại protein bám trên DNA cũng nhiều chứ ko chỉ có histon. Tuỳ theo yêu cầu tiếp theo là gì mà có những quy trình tương ứng.

hồi xưa mình dùng phenol/chlorform/ethanol extraction cũng phải dùng lạnh.
Tuy nhiên trong cái kit của promega để tach genomic DNA hiện nay nó ghi rõ, bước kết tủa bằng propanol nhiệt độ phòng, sau đó wash bằng 70% ethanol nhiệt độ phòng. mình cũng làm giống thế và thấy it works fine.

Bác aigu kiểm tra các dd phía trước bước tủa xem nó đã khéo léo chỉnh pH dung dịch xuống acid chưa?
Thường bây giờ dùng kit thì DNA được giữ bằng màng lọc (cột) nên ko cần phải tủa "xịn" như là hồi bác phải giữ DNA bằng ly tâm hoặc dùng que thuỷ tinh khoắng.

Man, do you really work on this?
KIT tách Genomics DNA của Promega (mới order xong, chắc chưa outdated) không dùng cái cột nào cả, chả có cái màng nào cả.
Nó kết tủa bằng 2-propanol và wash bằng 70% Ethanol.
(For plasmid, we do use spin columns from Qiagen)
Sorry bạn ngọc xuân là không trả lời vào câu hỏi của bạn mà lại "đi loanh quanh" nhé!
Những thông tin loại này bạn phải chịu khó google.